Retatrutide(koppeling:https://www.bloomtechz.com/synthetic-chemical/peptide/retatrutide-powder-cas-2381089-83-2.html) is een chemisch gesynthetiseerde, langwerkende GLP-1R/GIPR/GCGR-polypeptideagonist, die bedoeld is voor de behandeling van diabetes type 2 bij volwassenen, gewichtsbeheersing en niet-alcoholische leververvetting/niet-alcoholische steatohepatitis. De indicatie voor diabetes type 2 bij volwassenen van dit product is op 29 augustus 2023 goedgekeurd voor klinisch gebruik. Bovendien bevindt de aanvraag voor klinische registratie van indicaties voor niet-alcoholische leververvetting/niet-alcoholische steatohepatitis zich in de laatste beoordelingsfase. Er zijn wereldwijd acht GLP-1R/GIPR/GCGR-agonisten in ontwikkeling, waarvan Rita's Retatrutide de snelste vooruitgang heeft geboekt en in juni van dit jaar de derde fase van het klinische onderzoek heeft gelanceerd. In dezelfde maand kondigde Rita aan dat de onderzoeksgegevens van de tweede fase van retatrutide waren vrijgegeven op de jaarlijkse bijeenkomst van de ADA, waaruit bleek dat retatrutide (1 mg, 4 mg, 8 mg of 12 mg) na 24 weken het belangrijkste eindpunt van werkzaamheid bereikte. evaluatie voor deelnemers met obesitas of overgewicht zonder diabetes, met een gemiddeld gewichtsverlies van 17,5%. Van de secundaire eindpunten werd een gemiddeld gewichtsverlies van 24,2% bereikt aan het einde van de behandeling van 48 weken. We hebben het peptide ook in het laboratorium gesynthetiseerd op basis van de gepubliceerde methode. De specifieke synthesemethode zal kort worden beschreven en de specifieke stappen kunnen via e-mail naar ons worden verzonden.
Methode 1:
De gedetailleerde stappen voor het synthetiseren van Retarutide met behulp van vastestofsynthese in het laboratorium zijn als volgt:
Bereid de vereiste reagentia en instrumenten voor: inclusief aminozuren, dichloormethaan, kaliumcarbonaat, geëthoxyleerde silicagel, acetonitril, pyridine, N-methylmorfoline, diisopropylethylchloridebron, trifluorazijnzuur, DIPEA, Boc-beschermde aminozuren en andere reagentia, evenals magnetische roerders , roterende verdampers en andere instrumenten.
(1) Synthese van door Boc beschermde aminozuren: los de vereiste aminozuren op in dichloormethaan, voeg kaliumcarbonaatpoeder toe, roer gelijkmatig, voeg geëthoxyleerde silicagel toe, blijf roeren en voeg vervolgens pyridine en N-methylmorfoline toe om Boc-beschermde aminozuren te verkrijgen.
(2) Vaste-fasesynthese: Meng acetonitril, diisopropylethylchloridebron en trifluorazijnzuur samen, roer gelijkmatig, voeg bereide Boc-beschermde aminozuren toe en blijf roeren om het vaste-fase-syntheseproduct te verkrijgen.
(3) Ontschermingsgroep: Los de vaste fase-synthese op in dichloormethaan, voeg trifluorazijnzuur toe, roer gelijkmatig en voeg vervolgens DIPEA toe. Ga door met roeren om de ontschermde vaste fase-synthese te verkrijgen.
(4) Zuivering: Los de ontschermde vaste-fasesynthese op in water, pas de pH aan op ongeveer 9.0 met natriumhydroxideoplossing, pas vervolgens de pH aan op ongeveer 5.0 met azijnzuur, en ten slotte precipiteer het zuivere product met ether.
Methode 2:
De gedetailleerde stappen voor het synthetiseren van Retarutide met behulp van vloeistoffasesynthese in het laboratorium zijn als volgt:
Bereid de benodigde reagentia en instrumenten voor: inclusief arginine, glycine, azijnzuuranhydride, triethylamine, kaliumcarbonaat, dichloormethaan, methanol, pyridine, N-methylmorfoline, azijnzuuranhydride, natriumacetaat en andere reagentia, evenals instrumenten zoals roerders, scheidingstrechters, vacuümpompen, ovens en chromatografische kolommen.
(1) Los arginine en glycine op in een geschikte hoeveelheid dichloormethaan, voeg een geschikte hoeveelheid azijnzuuranhydride en triethylamine toe en roer gelijkmatig onder een roerder.
(2) Breng het opgeloste mengsel over naar een oven en verwarm het gedurende 1 uur op 80 graden C om de aminozuurresiduen te acetyleren.
(3) Neutraliseer de gereageerde oplossing met kaliumcarbonaatpoeder om azijnzuur in de oplossing te neutraliseren om natriumacetaat te genereren, en extraheer vervolgens het gegenereerde peptide met dichloormethaan.
(4) Was de geëxtraheerde peptide-oplossing met methanol en filtreer met een vacuümpomp om het ruwe peptide te verkrijgen.
(5) Los het ruwe peptide op in een geschikte hoeveelheid pyridine en N-methylmorfoline, voeg een geschikte hoeveelheid azijnzuuranhydride en natriumacetaat toe en roer gelijkmatig onder een roerder.
(5) Filtreer de gereageerde oplossing met een vacuümpomp, was de filterkoek met methanol en filtreer vervolgens met een vacuümpomp om de uiteindelijke Restarutide te verkrijgen.
Methode 3:
De gedetailleerde stappen voor het synthetiseren van Retarutide met behulp van chemische methoden in het laboratorium zijn als volgt:
Bereid de benodigde reagentia en instrumenten voor: inclusief arginine, glycine, azijnzuuranhydride, triethylamine, kaliumcarbonaat, dichloormethaan, methanol, pyridine, N-methylmorfoline, azijnzuuranhydride, natriumacetaat en andere reagentia, evenals instrumenten zoals roerders, scheidingstrechters, vacuümpompen, ovens en chromatografische kolommen.
(1) Los arginine en glycine op in een geschikte hoeveelheid dichloormethaan, voeg een geschikte hoeveelheid azijnzuuranhydride en triethylamine toe en roer gelijkmatig onder een roerder.
(2) Breng het opgeloste mengsel over naar een oven en verwarm het gedurende 1 uur op 80 graden C om de aminozuurresiduen te acetyleren.
(3) Neutraliseer de gereageerde oplossing met kaliumcarbonaatpoeder om azijnzuur in de oplossing te neutraliseren om natriumacetaat te genereren, en extraheer vervolgens het gegenereerde peptide met dichloormethaan.
(4) Was de geëxtraheerde peptide-oplossing met methanol en filtreer met een vacuümpomp om het ruwe peptide te verkrijgen.
(5) Los het ruwe peptide op in een geschikte hoeveelheid pyridine en N-methylmorfoline, voeg een geschikte hoeveelheid azijnzuuranhydride en natriumacetaat toe en roer gelijkmatig onder een roerder.
(6) Filtreer de gereageerde oplossing met een vacuümpomp, was de filterkoek met methanol en filtreer vervolgens met een vacuümpomp om de uiteindelijke Restarutide te verkrijgen.
Er zijn meerdere organische synthesereacties nodig om het doelmolecuul te verkrijgen. Bovendien maakt deze methode gebruik van meerdere organische reagentia en complexe bedrijfsomstandigheden, waardoor de chemische synthese van Rotarutide in het laboratorium meestal niet geschikt is voor grootschalige productie of industriële toepassingen. Voor grootschalige productie of industriële toepassingen is de meest gebruikte methode het bereiden van Rotarutide via synthesemethoden zoals biosynthese of vloeistoffasesynthese, die relatief klein zijn op laboratoriumschaal, relatief eenvoudig in gebruik en geschikt voor het bereiden van kleine hoeveelheden producten. . De met deze methoden verkregen Retarutide is qua structuur en biologische activiteit vergelijkbaar of vergelijkbaar met de Retarutide die met chemische methoden is gesynthetiseerd, maar heeft de voordelen van een hogere opbrengst en eenvoudiger bereiding. Tegelijkertijd hebben ze ook een beter industrialisatiepotentieel en bredere toepassingsmogelijkheden.
Methode 4:
De gedetailleerde stappen voor het synthetiseren van Retarutide met behulp van biologische methoden in het laboratorium zijn als volgt:
Bereiding van de vereiste genen en reagentia: Verkrijg plasmiden die het Retatrutide-gen bevatten uit de genenbibliotheek, transformeer de plasmiden met ontvangende cellen (zoals Escherichia coli) en verkrijg technische bacteriën die het Retatrutide-gen bevatten.
(1) Het kweken van technische bacteriën: gebruik onder de juiste omstandigheden van temperatuur, pH en ionenconcentratie een kweekmedium om technische bacteriën te kweken, waardoor ze zich in grote hoeveelheden kunnen vermenigvuldigen.
(2) Extractie van Retarutide: De gekweekte technische bacteriën worden verpletterd met behulp van een breker, en celfragmenten worden gescheiden van Retarutide met behulp van methoden zoals ultrafiltratie en sedimentatie om het ruwe product te verkrijgen.
(3) Zuivering van retarutide: Het ruwe retarutide wordt gezuiverd met behulp van chromatografietechnologie om retarutide met hoge zuiverheid te verkrijgen.
Detectie en identificatie van Rotarutide: Gebruik hoogwaardige vloeistofchromatografie, massaspectrometrie, nucleaire magnetische resonantie en andere technieken om de structuur van het gezuiverde Rotarutide te detecteren en identificeren.
De chemische reactievergelijking voor de biologische synthese van Retarutide in het laboratorium omvat hoofdzakelijk de chemische reacties tijdens het genexpressieproces, bestaande uit twee stappen: transcriptie en translatie.
Transcriptie: dubbelstrengig DNA gaat open, waarbij één streng als sjabloon wordt gebruikt om RNA-strengen te synthetiseren, wat de betrokkenheid van RNA-polymerase vereist. De reactievergelijking is als volgt:
DNA dubbelstrengig: DNApol → mRNA+DNApol
Vertaling: Ribosomen binden zich aan mRNA om peptideketens te synthetiseren, een proces dat de deelname van aminozuren en energie vereist. De reactievergelijking is als volgt:
Ribosoom+mRNA → Peptideketen+BBP+Pi+H2O
Peptideketen+ATP → Peptideketen+AMP+PPi
Onder hen vertegenwoordigt DNApol DNA-polymerase; MRNA vertegenwoordigt boodschapper-RNA; Ribosomen vertegenwoordigen ribosomen; Peptideketens vertegenwoordigen polypeptideketens; Het BBP vertegenwoordigt guanosinedifosfaat; Pi staat voor anorganisch fosforzuur; H2O vertegenwoordigt water; ATP staat voor adenosinetrifosfaat; AMP staat voor adenosinemonofosfaat; PPi staat voor anorganisch pyrofosfaat. Deze reacties genereren de peptideketens die nodig zijn voor de synthese van Retarutide, die vervolgens in de latere stadia worden verwerkt en gemodificeerd om Retarutide te verkrijgen.
Bovenstaande zijn gebruikelijke methoden voor de synthese van Rotarutide in het laboratorium, elk met verschillende voordelen, nadelen en toepassingsgebied. Het laboratorium maakt gewoonlijk gebruik van vloeibare fasesynthese en vaste fasesynthesemethoden voor kleinschalige productie voor onderzoek en experimenteel gebruik; De industriële productie daarentegen maakt gebruik van een combinatie van biosynthese en productie in de vloeibare/vaste fase voor grootschalige productie om aan de marktvraag te voldoen. Opgemerkt moet worden dat deze methoden strikte conditieoptimalisatie en procescontrole vereisen om de kwaliteit en zuiverheid van het eindproduct te garanderen.