Sephadex G75is een soort gelfiltervuller met goede prestaties. Het wordt voorbereid door dextran en epichloorhydrin te verknopen. Het is een kraalvormige gel met een grote hoeveelheid hydroxylgroepen, die gemakkelijk te zwellen is in water- en elektrolytoplossingen. De maximale uitsluitingslimiet van deze verbinding is 80000 en de specifieke zwelgraad hangt af van de hoeveelheid droge hars en bedrijfsomstandigheden. Onder bepaalde omstandigheden kan de zwellingsgraad van droge hars bijvoorbeeld 519 ml/g zijn. Wanneer het operationele pH -bereik 6.210 is (5.210 voor sommige producten), kan de verbinding stabiel blijven. Het wordt aanbevolen om het op kamertemperatuur, koel en weg van het licht in het temperatuurbereik van 430 graden (of 425 graden) op te slaan om de prestaties en stabiliteit te behouden. Deze stof is met name geschikt voor grote biomoleculen met een molecuulgewicht groter dan 80000. Voornamelijk gebruikt voor ontzilting en buffervervanging van dergelijke grote biomoleculen. Via een stap van één - is het mogelijk om snel te ontzoenen, verontreinigende stoffen te verwijderen en moleculen over te dragen naar een nieuwe bufferoplossing. Naast ontzilting en buffervervanging is Sephadex G-75 ook geschikt voor het zuiveringsproces van grote biomoleculen.
 |
 |
Sephadex G75is een dextran -gel, die voornamelijk wordt gebruikt voor de scheidings- en zuiveringstechnologie in biochemie en moleculaire biologie. Het belangrijkste gebruik van deze stof is als volgt:
In het ontziltingsproces kan het zouten (meestal kleine molecuul anorganische zouten) effectief verwijderen uit biologische moleculaire oplossingen. Het voordeel van deze stof is dat het gemakkelijk is om te werken, snel te werken en effectieve ontzilting kan bereiken zonder de activiteit van biomoleculen te veranderen. In addition, due to its excellent chemical stability and biocompatibility, it is suitable for desalination treatment of various biomolecules, including proteins, peptides, nucleic acids, etc. In practical applications, gel desalting is usually combined with other purification technologies such as ion exchange, affinity chromatography, etc., to achieve comprehensive purification and separation of biomolecules.
Deze stof heeft een breed scala aan toepassingen bij buffervervanging, vooral op het gebied van biochemie en moleculaire biologie. In het proces van eiwitzuivering is het bijvoorbeeld soms noodzakelijk om eiwitten van het ene buffersysteem over te dragen naar een ander buffersysteem dat meer geschikt is voor hun stabiliteit en activiteit. En deze stof kan dit doel effectief bereiken; In het proces van nucleïnezuurextractie is het ook noodzakelijk om het nucleïnezuur te scheiden van de oplossing die onzuiverheden en zouten bevat en over te brengen naar een nieuwe buffer voor latere operaties. Het is ook van toepassing op dit scenario; Tijdens de celkweek is het soms noodzakelijk om het kweekmedium of de buffer te vervangen om celgroei en activiteit te behouden. Het kan worden gebruikt om schadelijke stoffen uit oude cultuurmedia of buffers te verwijderen en nieuwe cultuurmedia of buffers te introduceren.
Moleculair zeven
In eiwitonderzoeks- en bereidingsprocessen is het meestal nodig om doel -eiwitten te scheiden van complexe mengsels. Het kan eiwitten scheiden op basis van hun grootte, waardoor eiwitzuivering wordt bereikt. Door de elutieomstandigheden aan te passen, zoals de ionsterkte en pH -waarde van het eluent, kan de scheidingsefficiëntie van eiwitten verder worden geoptimaliseerd. Naast eiwitten en nucleïnezuren kan het ook worden gebruikt voor de scheiding en zuivering van andere biomoleculen, zoals polysachariden, enzymen, antilichamen, enz. De bewegingssnelheid van deze biomacromoleculen in gel hangt af van hun grootte en vorm, om effectieve scheiding te bereiken. Hoewel deze stof niet direct wordt gebruikt als een hulpmiddel voor bepaling van het molecuulgewicht, kan het dienen als een hulpmiddel bij het bepalen van de molecuulgewicht.
In het proces van eiwitzuivering is het meestal nodig om onrustige onzuiverheden zoals zouten, metabolieten met kleine moleculen, ongebonden liganden, enz. Uit de eiwitoplossing te verwijderen. Deze stof kan deze kleine molecuulonzuiverheden effectief verwijderen uit eiwitoplossingen, waardoor de zuiverheid van eiwitten wordt verbeterd. Door het moleculaire zeefeffect kan deze small -molecuulonzuiverheden effectief worden verwijderd, wat resulteert in zuiverere nucleïnezuren. Enzympreparaten bevatten typisch kleine molecuulonzuiverheden zoals niet -gereageerde substraten, remmers, metabolieten, enz. Deze onzuiverheden kunnen de activiteit en stabiliteit van enzymen beïnvloeden. Door de gelfiltratie van het materiaal kunnen deze kleine moleculaire onzuiverheden effectief worden verwijderd en kan de zuiverheid van het enzymbereiding worden verbeterd. Naast eiwitten en nucleïnezuren,
Simuleren intercellulaire signaaltransductie
Intercellulaire signaaltransductie is het kernregulatiemechanisme van levensactiviteiten, waarbij complexe processen zijn zoals celherkenning, signaalconversie en fysiologische respons. Traditioneel onderzoek is vaak gebaseerd op live celmodellen, maar er zijn beperkingen zoals complexe signaalnetwerken en meerdere interfererende factoren.Sephadex G75is een klassiek dextran -gelfiltratiemedium. De poreuze structuur en het moleculaire zeefeffect bieden een uniek fysiek model voor het simuleren van intercellulaire signaaltransductie.
Een fysiek model voor het simuleren van intercellulaire signaaltransductie met behulp van Sephadex G-75
Simulatie van intercellulaire gap junctions
Gap junction is een hydrofiel kanaal gevormd tussen aangrenzende cellen via een linker, waardoor vrije uitwisseling van kleine moleculen met een molecuulgewicht mogelijk is<1500 Da. The pore size range of Sephadex G-75 (40-300 μ m) is much larger than that of intercellular junctions (about 1.5 nm), but its porous structure can simulate molecular diffusion processes in local microenvironments. For example:
Gradiëntvorming van signaalmoleculen: verschillende concentraties signaalmoleculen (zoals cAMP, Ca ²+) worden in de gelkolom geladen. Het verschil in diffusiesnelheid van kleine moleculen in de gelporie kan worden waargenomen door het moleculaire zeefeffect en de gradiënttransmissie van chemische signalen tussen cellen kan worden gesimuleerd.
Synergistische responsensimulatie: twee interacterende moleculen (zoals ligand en receptor) worden respectievelijk aan beide uiteinden van de gelkolom geladen en hun bindende kinetiek wordt geanalyseerd door het elutietijdverschil om het moleculaire herkenningsproces in de directe contactcommunicatie tussen cellen te simuleren.
Simulatie van moleculair contact op het membraanoppervlak
De communicatie tussen membraanoppervlakmoleculen is gebaseerd op de specifieke interacties van celmembraanoppervlakte -eiwitten. Sephadex G-75 kan dit proces simuleren door functionele modificatie:
Receptor ligandbindingsexperiment: gebiotinyleerde receptor -eiwitten (zoals EGFR) worden gefixeerd op het oppervlak van geldeeltjes, fluorescerende gelabelde liganden (zoals EGF) worden vastgelegd door de streptavidine -biotinesysteem en de bindingssignaalintensiteit wordt gecontroleerd met een fluorescentie -detector.
Concurrerende bindende analyse: voorbelast het receptorligandcomplex in de gelkolom, voeg concurrerende remmers van verschillende concentraties (zoals anti egfr -antilichamen) toe, bereken de remmingconstante (ki) door de elutiepiekverschuiving en simuleer het interventie -effect van geneesmiddelen op celsignaalroutes.
Simulatie van chemische signaaltransmissie
Chemische signaaltransductie is gebaseerd op de diffusie van chemische signaalmoleculen (zoals hormonen en cytokines) afgescheiden door cellen door lichaamsvloeistoffen of extracellulaire matrix tot doelcellen. Sephadex g - 75 kan een driedimensionaal diffusiemodel construeren:
Simulatie van paracrinesystemen: secretoire cellen (zoals macrofagen) en doelcellen (zoals T -cellen) worden respectievelijk ingekapseld in gelmicrosferen, en de activeringsstatus van doelcellen (zoals CD69 -expressie) wordt waargenomen door CO -kweek om het lokale effect van paracrinesignalen te simuleren.
Endocriene signaaltransmissie: fluorescerende gelabelde hormonen (zoals insuline) worden in de gelkolom geladen en hun interactie met gelporiën wordt geanalyseerd door de elutietijd, en de helft - Het leven van hormonen in bloedcirculatie en distributie van doelorganisatie wordt voorspeld door wiskundige modellen.
Toepassingsgeval van Sephadex G-75 in celsignaleringsonderzoek
Onderzoek naar transductie van rode bloedcelsignaal en integrinefunctie
De bloedplaatjesadhesiereceptor integrine IIB 3 is het meest voorkomende glycoproteïne op het oppervlak van het bloedplaatjesmembraan en is cruciaal voor hemostase en trombusvorming. Bestudeer het gebruik van Sephadex G-75 om de interactie tussen bloedplaatjes en subendotheliale collageen te simuleren:
Integrine -activeringsmodel: de gezuiverde integrine iib 3 werd gefixeerd op het oppervlak van geldeeltjes en oplosbaar fibrinogeen (FG) werd toegevoegd als ligand. De bindende kinetiek werd gedetecteerd door oppervlakte -plasmonresonantie (SPR). Er werd gevonden dat de affiniteit van integrine met FG na activering aanzienlijk was verbeterd (KD werd verlaagd van μm tot nm).
Antiplatelet -screening van geneesmiddelen: voorgelading integrine FG -complex in de gelkolom, voeg antiplateletgeneesmiddelen toe van verschillende concentraties (zoals tirofiban), bereken de remmingssnelheid van geneesmiddelen op integrine -activiteit door elutiepiekverplaatsing en bieden een hoog - doorvoer screening platform voor de ontwikkeling van nieuwe antithrombotische geneesmiddelen.
Regulatie van tumorgerelateerde signaalroutes
Tumorcellen bevorderen proliferatie en metastase door abnormale activering van signaalroutes zoals MAPK en PI3K/Akt. Sephadex G-75 kan worden gebruikt om belangrijke eiwitten in signaalroutes te isoleren en te zuiveren:
EGFR Signal Pathway Research: EGFR-eiwit werd gezuiverd door Sephadex G-75 gelfiltratie en de fosforyleringsstatus ervan werd geanalyseerd door massaspectrometrie. Er werd gevonden dat het fosforylatieniveau van Y1068- en Y1086 -locaties van EGFR significant werd verhoogd na EGF -stimulatie, die stroomafwaartse ERK1/2- en AKT -signalen activeerde.
Analyse van geneesmiddelresistentiemechanisme: in geneesmiddel - resistente maagkankercellen (SGC7901/VCR) werd UHRF1-eiwit geïsoleerd en gezuiverd door Sephadex G-75, en er werd gevonden dat de overexpressie ervan de activering van apoptose gerelateerde proteïnen (dergelijke caspase-3), chemotherapie-geneesmiddelen (IC ic ic ₅ verhoogde by-5-keer kan remmen (IC ic ic ic verhoogde by-5 keer).
Immuuncelsignalering en polysacharide regulatie
Rode algenpolysachariden (BFP) verbeteren de immuunrespons door de NF - κ B en MAPK -signaalroutes in macrofagen te activeren. Onderzoek naar de scheiding en zuivering van BFP en zijn componenten (F1, F2, F3) met behulp van Sephadex G-75:
Polysaccharide component analysis: BFP, F1, F2 and F3 with purity>95% werd verkregen door Sephadex G-75 gelfiltratie gecombineerd met DEAE-cellulose 52 ionenuitwisselingschromatografie, en hun molecuulgewichten waren respectievelijk 120 kDa, 85 kDa, 60 kDa en 45 kDa.
Activering van signaalpaden: in het RAW264.7 Macrofaagmodel kunnen BFP en zijn componenten de secretie van NO en TNF - aanzienlijk induceren, en het mechanisme omvat NF - κ B nucleaire translocatie en fosforylatie van JNK, ERK, ERK en P38 MAPK. De gezuiverde componenten gescheiden door Sephadex G - 75 toonden aan dat F1 het sterkste activeringseffect had op NF - κ B en MAPK -routes (de geen productie verhoogd met 2,5 keer en TNF - secretie met 3 keer).
Populaire tags: Sephadex G75 CAS 37224-29-6, leveranciers, fabrikanten, fabriek, groothandel, koop, prijs, bulk, te koop