Proteïnase K-poeder CAS 39450-01-6

Shaanxi BLOOM Tech Co., Ltd. is een van de meest ervaren fabrikanten en leveranciers van proteïnase k-poeder cas 39450-01-6 in China. Welkom bij groothandel bulk proteïnase k-poeder cas 39450-01-6 van hoge kwaliteit, te koop hier vanuit onze fabriek. Goede service en een redelijke prijs zijn beschikbaar.

Proteïnase K-poederis een zeer efficiënt, niet-specifiek serineprotease dat veel wordt gebruikt in de moleculaire biologie en biochemie, voornamelijk voor het afbreken van eiwitten en het verwijderen van verontreinigende eiwitten uit nucleïnezuurpreparaten. Het is afgeleid van de schimmel Engyodontium album (voorheen Tritirachium album) en behoudt zijn activiteit over een breed temperatuurbereik (20-60 graden) en pH (4-12), zelfs wanneer het wordt geïncubeerd in een oplossing die SDS (0,5-1%) of ureum (4M) bevat onder denaturerende omstandigheden.

Het enzym breekt op efficiënte wijze een breed scala aan eiwitten af, waaronder RNase en DNase, door peptidebindingen te splitsen (bij voorkeur door het hydrolyseren van het carboxyluiteinde van alifatische/aromatische aminozuren), en wordt daarom gebruikt voor het verwijderen van nucleases bij DNA/RNA-extractie om de integriteit van nucleïnezuren te garanderen. Bovendien wordt het vaak gebruikt bij weefselvertering (bijvoorbeeld in paraffine-ingebedde monsters), cellyse en proteomische onderzoeken.

Proteïnase K-poeder wordt meestal geleverd in gelyofiliseerde vorm, die zeer stabiel is (-20 graden voor langdurige opslag) en vóór gebruik moet worden opgelost in een buffer (bijv. Tris-HCl, EDTA). De activiteit ervan is afhankelijk van Ca²⁺, maar chelaatvormers zoals EDTA remmen de enzymactiviteit slechts gedeeltelijk. Zelfdegradatie moet tijdens het hanteren worden vermeden en inactivering door hitte bij 65 graden wordt aanbevolen. Vanwege het krachtige eiwithydrolyserende vermogen is zorgvuldige bescherming vereist om contact met de huid of slijmvliezen te voorkomen.

Proteïnase K-poeder, ook bekend als Proteinase K of EC 3.4.21.14, is een serineprotease geïsoleerd en gezuiverd uit Tritirachium album Limber. Sinds de eerste isolatie door Wolfgang Ebeling et al. in 1974 wordt proteïnase K op grote schaal gebruikt in de biochemie, moleculaire biologie, geneeskunde en industrie vanwege zijn hoge activiteit en brede substraatspecificiteit.

In het proces van DNA- en RNA-extractie is de belangrijkste functie van proteïnase K het afbreken van eiwitten die aan nucleïnezuren zijn gebonden, waardoor DNA of RNA vrij in oplossing kan blijven voor daaropvolgende extractie en zuivering. Vanwege de stabiliteit en hoge activiteit ervan in denaturerende middelen zoals ureum en SDS, wordt proteïnase K vaak gebruikt voor de isolatie van plasmiden of genomisch DNA en RNA.

proteïnase K kan de activiteit van RNAse remmen en RNA beschermen tegen afbraak.

1. DNA- en RNA-extractie

 

DNA-extractie: Protease K kan histonen hydrolyseren die aan DNA binden, waardoor DNA in oplossing kan dissociëren. Vervolgens werden onzuiverheden verwijderd via verschillende methoden, zoals extractie met fenolchloroform, precipitatie met ethanol, enz., en werd gezuiverd DNA verzameld.
RNA-extractie: Tijdens het RNA-extractieproces zijn RNA-enzymen gewoonlijk aanwezig in de omgeving, en het monstersysteem zelf kan ook RNA-enzymen bevatten, waardoor RNA zeer gevoelig is voor afbraak. Een kleine hoeveelheid toevoegen

2. In situ hybridisatietechnologie

 

Bij in situ hybridisatietechnologie wordt proteïnase K gewoonlijk gebruikt voor pre-hybridisatieverwerking om eiwitten rond het doel-DNA te verteren, de kans op probe-binding aan het doelnucleïnezuur te vergroten en het hybridisatiesignaal te versterken. Er moet echter worden opgemerkt dat wanneer de concentratie proteïnase K te hoog is, de verteringstijd te lang is of de incubatietemperatuur te hoog is, dit schade aan de celstructuur kan veroorzaken, wat kan leiden tot het afstoten van weefselcoupes en het verdwijnen van celkernen, waardoor de hybridisatieresultaten worden beïnvloed. Daarom is het in praktische toepassingen noodzakelijk om de concentratie en behandelingstijd van proteïnase K strikt te controleren.

3. Virusinactivatie en desinfectie

 

Protease K kan vanwege zijn sterke proteolytische activiteit worden gebruikt voor virusinactivatie en desinfectie. Onderzoek heeft aangetoond dat het behandelen van zuiver water en huishoudelijk afvalwater met een bepaalde concentratie proteïnase K virussen effectief kan inactiveren. Protease K kan, als virus-inactiverend desinfectiemiddel, de potentiële schade verminderen die conventionele oxidatieve chemische desinfectiemiddelen aan het menselijk lichaam veroorzaken, en de productie en het transport ervan zijn veilig zonder onomkeerbare milieuvervuiling.

4. Western-blotting en pulselektroforese

 

Protease K is ook op grote schaal gebruikt bij de bereiding van chromosoom-DNA voor gepulseerde elektroforese, Western-blotting en andere experimenten. In Western blot-experimenten kan proteïnase K worden gebruikt om niet-specifieke eiwitten uit het monster te verwijderen, waardoor de specificiteit en gevoeligheid van de blot worden verbeterd. Bij pulselektroforese-experimenten kan proteïnase K eiwitonzuiverheden in DNA-monsters afbreken en de elektroforese-efficiëntie verbeteren.

5. Eiwitdetectie en identificatie

 

Proteïnase K-poederkan ook worden gebruikt voor de detectie en identificatie van bepaalde eiwitten. In de studie van overdraagbare spongiforme encefalopathie (TSE) kan proteïnase K bijvoorbeeld worden gebruikt om eiwitten in hersenweefselmonsters te verteren en om de aanwezigheid van prioneiwitten te identificeren door de resistentie van pathogene prionen tegen proteïnase K te detecteren. Bovendien kan proteïnase K ook worden gebruikt voor experimenten zoals het bepalen van de lokalisatie van enzymen op celmembranen en het verwijderen van kationische eiwitten gebonden aan endotoxinen (zoals lysozym en ribonuclease A).

1. Medisch gebied

 

Klinisch gebruik: Protease K heeft een bepaalde geneeskrachtige waarde in de geneeskunde. Bijvoorbeeld de behandeling van indigestie met maagprotease, de behandeling van bronchitis met zure protease, de behandeling van vasculitis met elastase, enz. Daarnaast worden trypsine, chymotrypsine, enz. ook vaak gebruikt voor de zuivering van chirurgische etterende wonden en de behandeling van pleurale serosale verklevingen.
Virusdetectie en -diagnose: Protease K heeft ook potentiële toepassingen bij virusdetectie en -diagnose. Door de eiwitten in het virusmonster te verteren en het virusnucleïnezuur bloot te leggen, biedt het gemak voor daaropvolgende nucleïnezuurtests.

2. Industriële sector

 

Leerindustrie: Protease K wordt in de leerindustrie gebruikt voor ontharing en verzachtingsbehandeling, wat tijd kan besparen en de arbeidshygiënische omstandigheden kan verbeteren.
Textielindustrie: Protease K kan worden gebruikt in de textielindustrie, zoals het ontgommen van zijde.
Voedingsindustrie: Protease K kan in de voedingsindustrie worden gebruikt voor het mals maken van vlees, het zuiveren van alcohol, enz.
Wasmiddel: Enzym toegevoegd wasmiddel is een nieuw product in wasmiddelen. Wasmiddel dat alkalische protease bevat, kan bloedvlekken en eiwitvuil uit kleding verwijderen. Maar zorg er bij gebruik voor dat u de huid niet aanraakt om schade aan het eiwit op het huidoppervlak te voorkomen en allergische reacties zoals huiduitslag en eczeem te veroorzaken.

Structurele kenmerken

 

Het molecuulgewicht van proteïnase K is ongeveer 28.900 dalton (28,9 kDa), en er zijn ook literatuurrapporten van 29,3 kDa. De aminozuursequentie en de drie-dimensionale ruimtelijke structuur lijken sterk op de subtilisine van de serineproteasefamilie, maar er zijn ook enkele unieke kenmerken.

Disulfidebindingsstructuur: Protease K-moleculen bevatten disulfidebindingen, die hun stabiliteit vergroten en hen in staat stellen hun activiteit te behouden over een breed pH-bereik en bij hoge temperaturen.
Ca ² ⁺ bindingsplaatsen:Proteïnase K-poederbevat twee Ca ² ⁺-bindingsplaatsen, die, hoewel ver van het actieve centrum, cruciaal zijn voor het behouden van de katalytische activiteit van het enzym. Het verwijderen van Ca ² ⁺ zal ervoor zorgen dat protease K ongeveer 80% van zijn activiteit verliest, en het opnieuw introduceren van Ca ² ⁺ kan zijn activiteit slechts gedeeltelijk herstellen.
Katalytische triade: Protease K heeft een katalytische triade Asp-His69-Ser224, die een sleutelstructuur is voor zijn hydrolytische activiteit.

Werkingsmechanisme

 

Protease K kan bij voorkeur ester- en peptidebindingen hydrolyseren die grenzen aan het C--uiteinde van hydrofobe aminozuren, zwavel-bevattende aminozuren en aromatische aminozuren, waardoor eiwitten worden gehydrolyseerd tot korte peptiden. Het werkingsmechanisme omvat hoofdzakelijk de volgende stappen:

Enzymsubstraatbinding: Nadat protease K met het substraat is gemengd, bindt het substraat aan de actieve plaats van het enzym, waardoor een enzymsubstraatcomplex wordt gevormd.
Katalytische reactie: Onder invloed van de actieve plaats wordt de peptidebinding van het substraat gehydrolyseerd om een ​​product te vormen dat gescheiden is van het enzym.
Het sterke afbraakeffect van protease K maakt het tot een belangrijk reagens in verschillende biochemische reacties, vooral bij DNA- en RNA-extractieprocessen. Protease K kan eiwitten die aan nucleïnezuren zijn gebonden effectief afbreken, nucleïnezuren vrijgeven en de activiteit van nucleasen remmen, waardoor de afbraak van nucleïnezuren tijdens extractie wordt verminderd.

Proteïnase K-poederheeft als een zeer actief en substraatspecifiek serineprotease een breed scala aan toepassingen in de biochemie, moleculaire biologie, geneeskunde en industrie. Het kan eiwitten afbreken die aan nucleïnezuren binden en nucleïnezuren vrijgeven; Vergroot de mogelijkheid voor probes om te binden aan doelnucleïnezuren in in situ hybridisatietechnologie; Gebruikt voor virusinactivatie en desinfectie; Verwijder eiwitonzuiverheden in Western blot- en pulselektroforese-experimenten; Heeft geneeskrachtige waarde op het gebied van de geneeskunde; Gebruikt op industriële gebieden zoals leerverwerking, textielindustrie, voedingsmiddelenindustrie en productie van wasmiddelen. Bij gebruik van proteïnase K moet echter aandacht worden besteed aan de opslagmethode en gebruiksomstandigheden om de stabiliteit en activiteit ervan te garanderen.

Proteinase K is een serineprotease met een breed-spectrum dat veel wordt gebruikt in de moleculaire biologie, biochemie en medische onderzoeksgebieden vanwege zijn unieke enzymatische eigenschappen en stabiliteit. Als gevriesdroogde poedervorm speelt Proteinase K Poeder een cruciale rol in experimenten zoals nucleïnezuurextractie, eiwitvertering en weefselhomogenisatie. Het gebruik van welk biologisch reagens dan ook brengt echter potentiële risico's met zich mee, en de bijwerkingen ervan kunnen de gezondheid van de operators en de veiligheid van de experimentele omgeving in gevaar brengen.

Populaire tags: proteïnase k poeder cas 39450-01-6, leveranciers, fabrikanten, fabriek, groothandel, kopen, prijs, bulk, te koop