Shaanxi BLOOM Tech Co., Ltd. is een van de meest ervaren fabrikanten en leveranciers van streptavidine sigma cas 9013-20-1 in China. Welkom bij groothandel bulk hoogwaardige streptavidin sigma cas 9013-20-1 te koop hier vanuit onze fabriek. Goede service en een redelijke prijs zijn beschikbaar.
Streptavidine sigmais een uitgescheiden eiwit afkomstig van Streptomyces avidinii. Meestal wit of gebroken wit poeder. Deze vorm van streptavidine heeft een hoge zuiverheid en activiteit en is geschikt voor verschillende wetenschappelijke onderzoeksexperimenten en biotechnologische toepassingen. Het heeft een hoge affiniteit en specificiteit en kan biotinemoleculen niet covalent binden om stabiele streptavidinebiotinecomplexen te vormen. Het is ook een tetrameereiwit dat bestaat uit vier identieke subeenheden. Elke subeenheid kan zich binden aan een biotinemolecuul, dus deze tetrameerstructuur geeft Streptavidine een hoge stabiliteit en affiniteit. Het wordt veel gebruikt op gebieden zoals affiniteitschromatografie, immunokleuring en fluorescentielabeling in biologische experimenten. Door gebruik te maken van de sterke affiniteit tussen Streptavidine en biotine kan scheiding, detectie en zuivering van biomoleculen worden bereikt.
Kan zich binden met fluorescerende kleurstoffen, enzymen en andere markers om biologische probes te vormen. Deze probes hebben een brede toepassingswaarde in biologische experimenten, zoals het detecteren van de aanwezigheid en distributie van specifieke biomoleculen. Het wordt ook gebruikt bij de bereiding van biosensoren, medicijnafgiftesystemen en andere gebieden. Deze toepassingen breiden het toepassingsgebied van Streptavidine verder uit op het gebied van biologie en geneeskunde.
|
|
|
1. Maak kennis met streptavidine
Streptavidine (SA), een uitgescheiden eiwit afgeleid van Streptomyces avidinii, heeft een molecuulgewicht van ongeveer 65-66 kDa en een iso-elektrisch punt van ongeveer 6,0. Het is een tetrameereiwit dat is samengesteld uit vier homologe subeenheden, elk met een onafhankelijke biotinebindingsplaats - wat betekent dat één molecuul streptavidine tegelijkertijd kan binden aan vier moleculen biotine. De dissociatieconstante (Kd) tussen de twee is slechts ongeveer 10 ⁻¹⁵ M, wat een van de sterkste bekende niet-covalente biologische interacties is en kan worden beschouwd als het meest precieze "moleculaire vergrendelingsmechanisme" in de natuur.
Vergeleken met avidine afgeleid van eiwit, heeft het ongeëvenaarde voordelen:
Het bevat geen glycosyleringsmodificaties, is over het algemeen elektrisch neutraal en heeft daarom een extreem lage niet-specifieke binding onder fysiologische omstandigheden, een zuivere experimentele achtergrond en een uitstekende signaal-tot-ruisverhouding. Bovendien hebben de uitstekende weerstand tegen denaturatie en afbraak van protease, evenals het vermogen om extreme pH, hoge temperaturen (70-80 graden C), organische oplosmiddelen en conventionele denaturerende middelen (zoals SDS en ureum) te weerstaan, avidine vervangen en zijn ze de onbetwiste "gouden standaard" geworden in biotinebindende systemen.
Juist met deze uitstekende eigenschappen blinkt het uit op gebieden als de levenswetenschappen, in-vitrodiagnostiek, screening van geneesmiddelen en biosensoren.
2. Immuuntesten
De toepassing op het gebied van immuundetectie is de meest klassieke en meest gebruikte toepassing. Sinds de ontwikkeling ervan eind jaren zeventig is het biotine-streptavidinesysteem (BAS) de hoeksteen geworden van immuunlabeling en traceringsanalyse vanwege zijn ultra-hoge affiniteit en cascade-amplificatie-effect. Volgens statistieken gebruikt ongeveer 85% van de gangbare chemiluminescentie-analysatoren op BAS gebaseerde detectiemethoden, wat hun dominante positie aangeeft.
2.1 Enzymgekoppelde immunosorbenttest (ELISA)
Bij ELISA kan mierikswortelperoxidase (HRP) of alkalische fosfatase (AP) worden gekoppeld en kan het enzym via gebiotinyleerde antilichamen nauwkeurig naar het doelwit worden geleid. HRP katalyseert TMB-, DAB- of ECL-luminescerende substraten om krachtige chemische of optische signalen te produceren, terwijl AP BCIP/NBT, PNPP en andere substraten katalyseert om stabiele kleur- of chemiluminescentiesignalen te produceren. Een gebiotinyleerd doelmolecuul kan zich binden aan meervoudig gelabelde streptavidine, waardoor signaalversterking op meerdere- niveaus wordt bereikt en detectie van doelwitten met een lage dichtheid mogelijk wordt. Deze technologie wordt veel gebruikt in sandwich- en competitieve ELISA, en omvat scenario's zoals eiwitkwantificering, detectie van antilichamen, screening van pathogenen, enz.
2.2 Eiwit-immunoblotting (Western Blot)
Bij Western Blot kan binding met gebiotinyleerde secundaire antilichamen de signaalintensiteit van doeleiwitten op transferfilms aanzienlijk verhogen. Vergeleken met traditionele secundaire antilichaamsystemen kunnen BAS-systemen een sterkere signaalamplificatie bereiken vanwege hun tetravalente bindingseigenschappen. Bovendien wordt achtergrondinterferentie, vanwege de lage niet-specifieke binding van streptavidine, aanzienlijk verminderd, waardoor ze bijzonder geschikt zijn voor kwantitatieve analyse van eiwitten met een lage overvloed.
2.3 Immunohistochemie (IHC) en immunocytochemie (ICC)
HRP-gelabeld of AP-gelabeld streptavidine is het geprefereerde signaalversterkingsinstrument voor IHC en ICC. Het HRP-systeem is geschikt voor experimenten die een extreem hoge detectiegevoeligheid vereisen, terwijl het AP-systeem met name geschikt is voor systemen die HRP-remmers bevatten (zoals natriumazide) of experimentele scenario's die langdurige kleurontwikkeling en signaalstabiliteit vereisen. Door gebiotinyleerde probes of antilichamen aan streptavidineconjugaten te binden, kunnen doelmoleculen nauwkeurig worden gelokaliseerd in weefselcoupes of celmonsters.
2.4 Immunofluorescentie (IF) en in situ hybridisatie (ISH)
Met fluoresceïne gelabeld streptavidine (zoals FITC Streptavidin, PE Streptavidin, APC Streptavidin) is een universeel visualisatiehulpmiddel voor immunofluorescentiekleuring en in situ hybridisatie. De FITC-marker heeft een excitatie-/emissiegolflengte van ongeveer 494/519 nm en vertoont heldergroene fluorescentie; De excitatie/emissiegolflengte van PE-marker is ongeveer 565/578 nm, wat de "gouden standaard" is voor multi-color flowcytometrieanalyse; De APC-markering bestrijkt het verre rode spectrum, waardoor meer-kleurenbeelden mogelijk zijn. Deze fluorescerende markers kunnen nauwkeurig binden aan gebiotinyleerde antilichamen of nucleïnezuurprobes om lokalisatieanalyse en kwantitatieve detectie van doelmoleculen te bereiken.
2.5 Flowcytometrie (FACS)
Bij flowcytometrie wordt fluorescent gelabeld streptavidine (vooral PE-gelabeld) gebruikt om celoppervlakantigenen te detecteren die zijn gelabeld met gebiotinyleerde antilichamen. De uitstekende helderheid zorgt voor een extreem hoge signaal-tot-ruisverhouding, waardoor celpopulaties met lage antigeenexpressie op het oppervlak of zwakke signalen effectief kunnen worden gedetecteerd. Het is een onmisbaar reagens bij meer-color flowcytometrieanalyse.
2.6 Enzymgekoppelde immunospottest (ELISPOT)
AP-gelabeld streptavidine vertoont uitstekende prestaties in ELISPOT en is geschikt voor vaste-fase-analyse en weefsel-/celkleuringssystemen. Het kan op stabiele wijze de substraatproductie van telbare spotsignalen katalyseren voor detectie van cytokinesecretie op celniveau.
3. Zuivering van eiwitten en nucleïnezuren
3.1 Affiniteitschromatografie en eiwitzuivering
Streptomycine is de kerncomponent van affiniteitschromatografieverpakking. Nadat het te zuiveren eiwit met biotine is gemerkt, wordt het gemengd met streptavidine-agarosegel (zoals Streptavidine Agarose/Sepharose), en het gelabelde eiwit zal nauw binden aan streptavidine op het vulmiddel. Door te wassen om onzuiverheden te verwijderen en vervolgens het doeleiwit onder de juiste omstandigheden te wassen (zoals kokende SDS-PAGE-buffer, 0,1% SDS-behandeling of 95% formamide+10 mM EDTA-behandeling bij pH 8,2), kunnen producten met hoge- zuiverheid worden verkregen.
Als we de industriële productie van recombinant menselijk insuline als voorbeeld nemen: magnetische streptavidinebolletjes van hoge kwaliteit- kunnen meer dan 1200 pmol vrij biotine per milligram binden, en de gezuiverde eiwitzuiverheid kan meer dan 95% bereiken.
3.2 Immunoprecipitatie (IP) en chromatine-immunoprecipitatie (ChIP)
De toepassing van magnetische streptavidinekorrels bij immunoprecipitatie verbetert de experimentele efficiëntie aanzienlijk. Onderzoekers kunnen gebiotinyleerde antilichamen op magnetische streptavidinekorrels fixeren en deze samen met cellysaat incuberen.
De antilichamen vangen specifiek het doeleiwit en de ermee interacterende eiwitten op, waardoor een "magnetisch kraal antilichaam doeleiwit"-complex wordt gevormd. Het kan snel worden gescheiden onder invloed van een extern magnetisch veld, met eenvoudige bediening en hoge gevoeligheid. In ChIP-experimenten werden magnetische streptavidinekorrels ook gebruikt om gebiotinyleerde DNA-eiwitcomplexen te vangen en de interactie tussen eiwitten en DNA te bestuderen.
3.3 Pull-down-experiment
Bij de studie van eiwit-eiwitinteracties kunnen magnetische kralen gebiotinyleerde aaseiwitten vangen en vervolgens "vissen" naar pre-eiwitten die ermee interageren. Bij het bestuderen van belangrijke signaalroutes in tumorcellen worden bijvoorbeeld specifieke antilichamen die het P53-eiwit herkennen geïmmobiliseerd op magnetische streptavidinekorrels en tezamen geïncubeerd met tumorcellysaat om P53 en de bijbehorende eiwitten effectief te verrijken. Vergeleken met traditionele immunoprecipitatiemethoden heeft IP met magnetische kralen een hogere gevoeligheid en specificiteit en kan het doeleiwitten met een lage dichtheid effectiever verrijken.
3.4 RNA-pull-naar beneden
Magnetische kralen zijn ook geschikt voor RNA-pull-experimenten. Na binding met magnetische streptavidineparels kunnen gebiotinyleerde RNA-sondes eiwitten vangen die interageren met het RNA uit cellysaten voor het bestuderen van RNA-eiwitinteractienetwerken.
3.5 Bereiding van enkelstrengs DNA en extractie van nucleïnezuren
Het kan zich binden met gebiotinyleerde oligonucleotiden voor de bereiding van enkelstrengs DNA en efficiënte extractie van nucleïnezuren, en speelt een belangrijke rol bij moleculair klonen en genetische manipulatie.
4. Detectie van hoge doorvoer en screening van geneesmiddelen
4.1. TR-FRET-testplatform
Het kan worden gekoppeld aan luminescerende chelaten zoals europiumchelaten om signaalkoppeling en moleculaire opname uit te voeren in het TR-FRET-detectiesysteem (time-resolved fluorescentie resonantie energieoverdracht). THUNDER™ Het met europium gelabelde streptavidine dat specifiek is ontworpen voor het TR-FRET-experimentele platform kan bijvoorbeeld stabiel binden aan verschillende gebiotinyleerde gemodificeerde moleculen en wordt veel gebruikt bij analyse van eiwitinteracties en voorlopige screening van doelgeneesmiddelen.
Dit systeem is homogeen en heeft een hoge-doorvoer, waardoor het een krachtig hulpmiddel is voor de moderne ontwikkeling van geneesmiddelen.
4.2 Gerichte medicijnafgifte
De biotinebindende eigenschappen maken het tot een ideale drager voor op medicijnen gerichte toedieningssystemen. Door medicijnmoleculen te koppelen aan biotine en gebruik te maken van het gerichte bindingsvermogen van streptavidine, kan een nauwkeurige medicijnafgifte worden bereikt, waardoor de behandelingsefficiëntie wordt verbeterd en bijwerkingen worden verminderd.
4.3 Biosensoren en biochips
Het is het kernmateriaal voor de productie van biosensoren en biochips. Door streptavidine op het oppervlak van de chip te immobiliseren als een vangelement, kunnen met biotine gelabelde eiwitsondes of antilichamen erop worden geïmmobiliseerd, waardoor een hoge-doorvoer en hoge- gevoeligheidsdetectie wordt bereikt. Bij de vroege screening van eiwitchips op hart- en vaatziekten worden bijvoorbeeld magnetische streptavidinebolletjes op het chipsubstraat gefixeerd en gebruikt om gebiotinyleerde eiwitsondes te binden. Hierdoor kunnen afwijkingen nauwkeurig worden gedetecteerd bij patiënten in de vroege stadia van de ziekte en wanneer de bloedmarkerconcentraties zo laag zijn als cTnI van 0,01 ng/ml, waardoor het diagnostische venster met 2-3 uur wordt vervroegd vergeleken met traditionele diagnostische methoden.
5. Celbiologie en beeldvorming
5.1 Labeling van celoppervlakken en sortering van fluorescerende cellen
Fluorescerend gelabeld streptavidine (zoals Vari Fluor 488 Streptavidin) wordt veel gebruikt voor het labelen van celoppervlakken en het sorteren van fluorescente cellen. Het emissiespectrum bestrijkt het gehele spectrum van zichtbaar en nabij{2}}infrarood licht, en bij labelexperimenten met meerdere- kleuren kan het gemakkelijk de kern- en cytoplasmatische structuur binnendringen en doeleiwitten labelen voor beeldvorming en analyse.
5.2 Nanotechnologie en zelfassemblage van materialen
De tetravalente bindingseigenschappen maken het tot een ideale "brug" voor zelf-assemblage van nanomaterialen. Door de gerichte binding van biotinestreptavidine kunnen verschillende nanostructuren worden geconstrueerd voor interdisciplinair onderzoek zoals biologische beeldvorming en milieumonitoring.
6. Anti-streptavidine-antilichaam
Met het wijdverbreide gebruik van het streptavidine-biotinesysteem is er een vaak over het hoofd gezien probleem aan het licht gekomen - endogene anti-streptavidine-antilichamen (ASA) in het monster kunnen het detectiesysteem verstoren. Uit onderzoek is gebleken dat de binding van ASA aan SA in het reactiesysteem de correcte constructie van specifieke antigeen-antilichaamsystemen kan beïnvloeden, wat resulteert in een verminderde nauwkeurigheid van koppelings-, detectie- of diagnostische resultaten.
Om deze uitdaging aan te pakken zijn er anti-streptavidine-antilichaamdetectiekits ontstaan, die kunnen worden gebruikt om endogene ASA in patiëntenmonsters te detecteren en de interferentie ervan met het BAS-systeem te voorkomen. Roche Custom Biotech heeft een inactieve streptavidinemutant ontwikkeld (Streptavidin rec. inactive, poly), die zonder extra stappen aan het huidige systeem kan worden toegevoegd om ASA-interferentie specifiek te blokkeren en te elimineren, waardoor de nauwkeurigheid en specificiteit van het detectiesysteem wordt verbeterd.
7. Biotine-interferentie
Hoewel het streptavidine-biotinesysteem krachtig is, wordt het geconfronteerd met een steeds ernstiger probleem: - biotine-interferentie.
Wanneer er een hoge concentratie vrij biotine in het testmonster zit, concurreert het met gebiotinyleerde antilichamen om de bindingsplaats van streptavidine, wat resulteert in vertekende detectieresultaten.
Orale toediening van 100 mg biotine kan leiden tot een piekplasmaconcentratie van 375-450 ng/ml; Patiënten met multiple sclerose kunnen 300 mg/dag oraal innemen, en hun plasmabiotinespiegels kunnen hoger zijn dan 1000 ng/ml; Dagelijkse inname van 500 mg biotine kan leiden tot extreem hoge concentraties biotine in het bloed. Bij sandwich-immunoassays kan overmatig biotine foutieve lage resultaten opleveren; Bij competitieve immunoassays kan dit leiden tot foutief hoge resultaten.
Talrijke onderzoeken hebben aangetoond dat TSH, Thyroxine PTH, endocriene tests zoals adrenocorticotroop hormoon, prolactine, testosteron, cortisol, evenals tumormarkers en hartfunctionele markers, allemaal in verschillende mate worden beïnvloed door biotine-interferentie. De FDA heeft achtereenvolgens waarschuwingsinformatie en bijbehorende richtlijnen uitgegeven. De coping-strategieën omvatten: seriële verdunning van monsters, overstappen op niet-BAS-methoden zoals vloeistofchromatografie-massaspectrometrie, opnieuw testen na biotineklaring (zo kort als 2 uur, zo lang als 15 dagen of zelfs maanden), of het gebruik van gratis biotine-wegvangers.
Veelgestelde vragen
Waar komt streptavidine tot expressie?
Bijna 95% van de streptavidine, die tot expressie wordt gebracht in Escherichia coli, wordt aangetroffen als een insluitingslichaampje. Eiwit dat tot expressie wordt gebracht in de vorm van een inclusielichaam, vereist verdere stappen voor het vouwproces dat verband houdt met de zuivering ervan.
Waarom wordt streptavidine gebruikt bij ELISA?
Gebiotinyleerd secundair antilichaam en streptavidine-HRP worden vaak gebruikt in de ELISA om de detectielimiet (LOD) te verbeteren. Streptavidine is een tetrameer eiwit met een molecuulgewicht van 60 kDa; het heeft een hoge bindingsaffiniteit voor biotine (in het lage femtomolaire bereik) en vier biotinebindingsplaatsen.
Waar wordt streptavidine voor gebruikt?
Streptavidine is een tetrameer eiwit dat gewoonlijk in de biotechnologie wordt gebruikt als stabiele linker vanwege zijn sterke affiniteit voor biotinemoleculen. Het vormt een zeer stabiele binding onder goed-bewaarde biologische omstandigheden en wordt vaak gebruikt in conjugatieschema's.
Is streptavidine een antibioticum?
Streptavidine werd voor het eerst gevonden als antibiotica en het antibiotische effect werd verminderd door een overmatige hoeveelheid biotine. Daarom onderzochten we de invloed van biotine op het immunosuppressieve effect van streptavidine.
Populaire tags: streptavidin sigma cas 9013-20-1, leveranciers, fabrikanten, fabriek, groothandel, kopen, prijs, bulk, te koop